这是M-MLV 逆转录酶的一种类型,已经经过基因改造,去除了RNase H 的活性。虽然许多研究者已经成功使用M-MLV RT(H+) 进行了一些cDNA 制备应用及分析,但是缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA 的制备及包含高比例全长cDNA 的文库制备提供了更好的选择。
特点 - 优点
• 无RNase H 活性:为以长RNA 为模板制备全长cDNA 提供了优化条件。
• 提供5× 反应缓冲液:250mM Tris-HCl (pH 8.3,25℃ ),375mM KCl,15mM MgCl2,50mM DTT。
• 可加热失活:70℃加热10 分钟,可使M-MLV RT 失活。
应用
• cDNA第一链合成
• 引物延伸
源
Recombinant E. coli strain.
存储缓冲液
20mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C), 0.2M NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% Nonidet® P-40 and 50% glycerol.
储存条件
储存于-20℃。
单位定义
One unit is the amount of enzyme required to incorporate 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C. The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25°C), 7mM MgCl2, 40mM KCl, 10mM DTT, 0.1mg/ml BSA, 0.5mM [3H]dTTP, 0.025mM oligo(dT), 0.25mM poly(A) and 0.01% NP-40.