使用麦胚提取物进行体外翻译的常规方法一般采用由SP6或T7 RNA 聚合酶启动子在体外合成的RNA作模板,整个过程包括多个独立的反应,且每个反应之间有好几个步骤。TNT® 提取物系统将转录反应的组分直接整合到翻译反应中,形成混合物,避开了常规方法的繁琐步骤。此外,与使用RNA 模板的常规麦胚提取物体外翻译系统相比,TNT® 提取物系统可在1.5 小时内生产出更多的蛋白 (2-6 倍)。
在TNT® T7 Quick Coupled Transcription/Translation System、Flexi® Rabbit Reticulocyte Lysate System 和TNT® Coupled Wheat Germ Extract System 中,可以使用25mM 醋酸镁和2.5M 氯化钾对体外翻译反应进行优化。
特点 - 优点
• 可靠:TNT® 系统经过严格的质量控制,无论您的模板是线性的DNA( 仅限T7),还是环状质粒,都能确保得到高水平的转录/ 翻译性能。
• 方便:单管操作避免了常规小麦胚芽翻译所需要制备RNA 的时间和精力,可在6-8 小时内看到由放射自显影得到的翻译结果。
• 通用性:T7系统既可从线性DNA 也可以从环状DNA 生产蛋白质( 环状DNA 仅用于SP6 系统,如果模板是PCR 产物,则使用Cat.# L5540,TNT® T7Quick for PCR DNA)。
• 包含对照:系统中包括了萤光素酶对照DNA 和萤光素酶检测试剂,可用作功能对照。只有全长的萤光素酶基因才有活性。
应用
• 蛋白-蛋白相互作用研究。
• 研究蛋白活性研究。
• Wheat Germ Extract System 尤为适合哺乳动物转录因子的翻译,因为它不包含哺乳动物转录因子。
• 蛋白-核酸相互作用
• 同时表达在不同噬菌体聚合酶启动子控制下的多个基因。
• 突变体的快速筛选和分析。
• 截短蛋白检测