人重组类胰蛋白酶的上市有助于对胰酶和肥大细胞的生物学功能有更直接和全面的研究,并可以辅助进行类胰蛋白酶体内靶标的鉴定。重组人表皮 βI 类胰蛋白酶(rhSkin β Tryptase)与重组人肺 βII 类胰蛋白酶(rhLung β Tryptase)均是中性丝氨酸蛋白酶。人源 β 类胰蛋白酶已被成功克隆,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达,为具有活性的四聚体酶,经亲和层析纯化。这两种酶有不同的缓冲液配方、酶浓度和糖基化特征。提供的 rhLung Tryptase 溶于缓冲能力很低但浓度很高(2mg/ml)的缓冲液中,不含肝素,用于色谱分析。将这两种重组酶连同天然的肺类胰蛋白酶进行糖苷酶消化,然后使用 Western 分析,结果显示 rhLung Tryptase 的糖基化特征与尸酶非常相似。
特异活性:以 0.4mM NαCBZ-L- 赖氨酸硫代苯酯作底物,与 Ellman`s Reagent(5,5`-Dithio-bis(5-Nitrobenzoic Acid))共同应用时,在 1ml 的最终体积下,检测水解率,在 25℃条件下孵育 1 分钟,检测 410nm 处的吸光度值。1 个酶单位定义为每分钟 1.0 个吸光度值的变化。
• rhSkin β 类胰蛋白酶 >1,000u/mg 蛋白。
• rhLung β 类胰蛋白酶 >1,200u/mg 蛋白。
浓度:
• rhSkin β 类胰蛋白酶:200μg/ml;
• rhLung β 类胰蛋白酶:2mg/ml。
特点 - 优点
• 活性具有高特异性:比野生型的肺类胰蛋白酶高出 130-150%。
• 结果一致:重组蛋白的表达可确保不同批次的酶均衡一致。
• 安全:避免接触与野生型尸体类胰蛋白酶相关的人类病原体。
• 纯度高:表皮类胰蛋白酶 β 和肺类胰蛋白酶 β 不含其它污染蛋白质,每毫克蛋白酶活力高,避免野生型胰蛋白酶与外源蛋白相互作用。