检测碱性磷酸时，底物的制备方法：每5ml 碱性磷酸酶缓冲液(100mM Tris-HCl [pH 9.0]，150mM NaCl，1mM MgCl2) 中加入33μl的NBT 和16.5μl 的BCIP。先加入NBT，混匀后，再加入BCIP，再次混匀。该试剂配制好后，应在1 小时内使用。未用试剂应弃掉。
浓度：BCIP (50mg/ml) 溶于100% 二甲基甲酰胺；NBT(50mg/ml) 溶于70% 二甲基甲酰胺。
特点 - 优点
• 质量检测：每一批BCIP/NBT 显色底物均经过检验，可用于印迹分析。