Promega Functional Bioassay性能全解析

近年来随着大分子药物(Biologics Drug)市场的大热， 对于Functional Bioassay的需求也越发强烈。与化学小分子药物不同，Biologics Drug是结构更加复杂的大分子，对外界条件敏感，具有一定的不稳定性。因此，稳定可靠的Bioassay就成为了Biologics研发过程中不可或缺的一环。

所谓Bioassay,全称Biological Assay。FDA提到评估生物制品Potency的传统方法是开发一种定量的生物活性检测方法（Bioassay)，用于检测与该生物制品产生特定结果的特定能力相关的产品活性，且需要满足The Regulatory Requirements for Potency of Licensed Biological Products的标准。

从上述Bioassay定义描述中我们可以注意到几个关键词：一个Qualified Bioassay是可以用于评估生物制品药效(Potency)，特定功能，且可定量。首先Bioasssay必须是能否反应MOA的检测法，这是监管机构的明确要求，且在Potency评估中FDA明确Potency Assay需要进行评估，其指标包括：

其中，准确度（Accuracy）和精确度（Precision）在生物活性检测和大分子药物的开发中至关重要。准确度是对结果与目标值或参考值之间相近度的衡量。精确度是对可重复性的衡量。让我们以图说明：

Jing Shi与Marian McKee在2015年BioProcess International 上发表的文章'Building a Robust Biological Assay for Potency Measurement'中强调Bioassay的设计和开发的一个重要方面是确保最终分析足够可靠，能够检测生产一致性，并与临床结果相关。为了实现这一点，Bioassay需要在生物制品的整个生命周期中不断发展和完善。在这篇文章中，Shi和McKee讨论了建立一个适用于生产过程（cGMP）Lot Release检测水平的可靠的、可重复的细胞学Potency Bioassay的考虑因素。与Biochemical的方法相比，基于细胞检测的Bioassay由于其更能反应MOA，且避免使用动物而备受追捧。

对于Bioassay的评估的性能指标范围在药物研发的不同阶段而有所不同，不同的Bioassay也不同，并没有标准化的统一的标准范围。因此，在研发早期即建立可靠的Bioassay方法，并随着Biologics药物研发的进展根据实际情况不断累积历史数据，就变得至关重要，并不断优化Bioassay方法。进入Lot Release阶段后，Bioassay方法学应确定下来，不会轻易再改变，Bioassay评估范围指标也会收窄，这主要源于历史数据累积及方法优化后，对于数据要求的提高。

举例说明

以目前最热门的免疫检查点调控抗体药PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay为例，我们来看一下其作为Potency Assay的各项评估指标：

PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay使用了与基于原代细胞检测不同的检测方式：工程化效应细胞稳定表达了PD-1和NFAT诱导性的萤光素酶;而靶细胞稳定表达PD-L1和TCR activator。当抗体存在并阻断PD-1与PD-L1的结合，TCR与靶细胞的TCR activator引起的信号可正常诱导NFAT元件调控的萤光素酶报告基因表达而产生发光。

以上数据证明Promega的PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay是具有生物相关性，可以反应MOA的稳定可靠，准确且精确，能够用于Lot Release的Bioassay!