Promega新品来啦-ProAlanase, 蛋白质组学研究中胰蛋白酶的最新替代品
日期：
2021-07-13
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说起胰蛋白酶，相信做过蛋白质组学研究的伙伴们都再熟悉不过了。胰蛋白酶作为最为经典的质谱分析样品制备用蛋白酶被广泛使用。不过用胰蛋白酶消化通常提供不完整的序列覆盖或翻译后修饰的缺失鉴定。与胰蛋白酶一样，其他蛋白酶如Lys-C、Asp-N、Glu-C和Arg-C也会在带电荷的残基上裂解，从而使蛋白质中被消化的区域产生偏向。
Promega推出的新产品ProAlanase，它在蛋白质组中独特的、非带电的位点上裂解。ProAlanase是一种内切蛋白酶，优先切割蛋白中脯氨酸C末端，其次切割丙氨酸。从黑曲霉中分离纯化的ProAlanase也被称为An-PEP或EndoPro。用ProAlanase消化蛋白质得到的多肽适合于质谱鉴定和表征分析。
ProAlanase羧基端切割特异性。人K562提取物在pH值1.5，37℃下用ProAlanase消化2小时，使用1:100 酶:底物比。进行LC-MS /MS进行分析后，以ByonicTM软件进行数据分析。切割主要发生在脯氨酸和丙氨酸的羧基端。
pH 1.5时消化最佳
ProAlanase在pH为1.5时表现出最佳的肽识别性和脯氨酸特异性。
蛋白消化时间短性能表现最佳
短时间的消化可使ProAlanase达到最佳的消化效率和特异性。较长的消化时间反而会导致特异性的丧失(左)，而消化效率也没有明显提高(右)。
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