双报告基因经常被用于提高实验的准确性。“双报告”一词指的是在同一个实验体系内同时表达和检测两种不同的用作报告蛋白的酶。通常“实验组”报告基因反映的是某特定的实验条件所导致的效应,而共转染的“对照组”报告基因的活性则提供一个内对照,作为基线水平的反映,可将用于细胞活力或转染效率所引起的样品间差异减至最小。其他原因引起的误差,如加样体积的差异,细胞裂解效率和检测效率的差异等,均可被有效的降低。
Promega公司开发了Dual-Luciferase Reporter(DLRTM)检测试剂盒与Dual-DLRTM 检测试剂盒,实现了针对同一样品依次检测萤火虫荧光素酶和海肾萤光素酶。通过将实验体系中目的基因反应与无关因素的影响加以区分,DLRTM与Dual-DLRTM 检测试剂盒可提供快速而便利的检测方法,用来解释报告基因数据的生物学意义。
Dual-Luciferase 检测系统特点:
带有海肾萤光素酶作为内对照:与但报告基因相比较,结果更准确。
方便的单孔检测模式:不需要将样品分成几份在进行报告基因的检测。
快速:两种报告基因的检测均可在几秒钟之内完成。
灵敏度高:可进行弱启动子、低表达/调控水平、低转染效率时蛋白表达的研究。
线性范围宽:线性范围覆盖酶浓度的7个数量级,通常不需要对活性非常高的样品进行稀释。
背景低:哺乳动物细胞中无内源性报告基因的表达。
Dual-GLoTM 萤光素酶检测系统的特点:
提高了精度和准确性:将试验结果针对内对照进行归一化处理,共报告基因使细胞数量与健康程度、转染效率以及非特异性的细胞反应的影响减至最低。
均质模式:减少操作步骤,不需要离心或裂解步骤,对生长在培养基中的细胞可直接进行两种报告基因的检测。
信号稳定:可进行小规模检测,也可进行连续的96孔或384孔板检测,可在加入试剂2h内检测到发光信号。
方便:两步法,适用于任何一种发光检测仪。
线性范围宽:可覆盖酶浓度的6个数量级。
Dual-Luciferase 检测系统与Dual-GLoTM 萤光素酶检测系统区别:
发光检测仪
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